取 10mL 乳制品樣品于 50mL 離心管中。
加入 5mL 10% 的三氯醋酸溶液作為沉淀劑,充分振蕩 10 分鐘(振蕩速度為 200r/min),使蛋白質充分沉淀。
將離心管放入離心機中,以 4000r/min 的轉速離心 15 分鐘。
離心結束后,小心取出上清液,即為處理后的樣品,此步驟可有效去除樣品中的蛋白質等干擾物質。
標準溶液配制:準確稱取一定量的三聚氰胺標準品,用超純水溶解并定容,配制一系列不同濃度的三聚氰胺標準溶液(0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L)。
熒光探針溶液配制:將量子點溶于磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.0)中,配制濃度為 2μmol/L 的量子點熒光探針溶液。
反應體系構建:分別取 2mL 不同濃度的三聚氰胺標準溶液和處理后的樣品溶液于比色管中,各加入 2mL 量子點熒光探針溶液,充分混合均勻。
反應條件控制:將比色管置于 25℃恒溫水浴中反應 20 分鐘,控制反應體系的 pH 值為 7.0。
便攜式熒光比色計檢測:反應結束后,將比色管中的溶液倒入便攜式熒光比色計的比色皿中,設置激發(fā)波長為 365nm,發(fā)射波長為 520nm,測定溶液的熒光強度。
數(shù)據(jù)處理與結果分析:以三聚氰胺標準溶液的濃度為橫坐標,對應的熒光猝滅程度(空白熒光強度與樣品熒光強度的差值與空白熒光強度的比值)為縱坐標,繪制標準曲線。根據(jù)樣品溶液的熒光猝滅程度,從標準曲線上查得樣品中三聚氰胺的濃度。
檢測限:通過對低濃度三聚氰胺標準溶液進行多次檢測,以 3 倍信噪比對應的濃度作為該方法的檢測限,經(jīng)測定,本方法的檢測限可達 0.05mg/L,滿足乳制品中三聚氰胺的檢測要求。
精密度:對同一濃度的三聚氰胺標準溶液進行 6 次平行測定,計算相對標準偏差(RSD),結果顯示 RSD 小于 5%,表明該方法具有良好的精密度。
準確度:采用加標回收實驗,向已知濃度的乳制品樣品中加入不同量的三聚氰胺標準品,進行回收實驗,計算回收率,回收率在 85%-115% 之間,說明該方法具有較高的準確度。
特異性:選取乳制品中可能存在的干擾物質,如尿素、葡萄糖、乳糖等,進行特異性實驗,結果表明這些干擾物質對三聚氰胺的檢測無明顯影響,該方法具有良好的特異性。
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